Evaluation of aversive behavior in Rattus norvegicus experimentally infected by two distinct strains of Toxoplasma gondii (ME49 and VEG): study of epigenetic markers

ABSTRACT Background: Behavioral changes in Rattus norvegicus infected with two strains of Toxoplasma gondii (ME49 and VEG) were investigated. Methods: Rats were evaluated for motor activity and aversion or attraction to cat urine 60 days after infection. After euthanasia, arginine-vasopressin gene methylation in the central nervous system was evaluated. Results: A significant difference was observed in the methylation of the arginine-vasopressin promoter gene between rats infected with the ME49 and VEG strains. Conclusions: Although differences were not observed in many parameters, significant differences were observed in the methylation of the arginine-vasopressin promoter gene in rats infected with the two studied strains.

Measles, rubella, mumps and Toxoplasma gondii antibodies in saliva of vaccinated students of schools and universities in São Paulo City, Brazil

ABSTRACT Introduction: Vaccines are well-established public health interventions with major impacton the prevalence of infectious diseases, but outbreaks are occurring frequently due to pri-mary and secondary failures, despite high coverage. Surveillance of efficacy and duration ofinduced immunity is a difficult task as it requires invasive blood sampling in children andteenagers. Saliva can be an acceptable alternative source of IgG to assess vaccine efficacyand toxoplasmosis incidence. We investigated IgG response for measles, mumps, rubella,and T. gondii in saliva samples of vaccinated young people. Methods: Saliva was collected from 249 public schools students from São Paulo, Brazil, aged7 to 13 years old, during an interactive exhibition on hygiene. We used S. aureus proteinA solid phase capture assay for IgG reactive to biotinylated purified proteins. Paired salivaand serum (47) were tested from young adults with serum evidence of T. gondii infectionand from negative children less than 12 month old for standardization. Reproducibility wasgreater than 98% and sensitivity and specificity of the saliva assays were greater than 95%,as well as the concordance of paired saliva and serum samples. Results: Saliva from high school students showed a prevalence of 8.5% (95% CI: 5.0-11.9%)for anti T. gondii IgG; 96.8% (94.6-99%) of anti-measles IgG; 59.1% (53-65%) of anti-rubella IgG,and 57.5% (51.3-63.6%) of anti-mumps IgG. Discussion: The prevalence of antibodies against mumps and rubella after 6-8 years of vaccination was lower than against measles among students. The findings of this study demonstrate the feasibility of saliva sampling for follow-up of vaccine immune status in teenagers. This useful approach allows for IgG detection for vaccine control or epidemio- logical studies.

Natural versus recombinant viral antigens in SARS-COV-2 serology: challenges in optimizing laboratory diagnosis of COVID19

OBJECTIVES: COVID-19 is a public health emergency of international concern whose detection in recovered asymptomatic patients is dependent on accurate diagnosis as it enables the estimation of the susceptibility of the population to the infection. This demand has resulted in the development of several commercial assays employing recombinant proteins, but the results of these assays are not reliable as they do not involve comparison with natural viral antigens. We independently used the SARS-CoV-2 whole viral antigen (WVA) and recombinant nucleocapsid protein (rNP) to develop in-house ELISAs for IgG detection; the results of these ELISAs were then compared to obtain reliable results. METHODS: WVA and rNP ELISAs were performed on COVID-19 negative sera from patients before the pandemic in Brazil, and on RT-qPCR-positive or SARS-CoV-2-IgG against rNP and IgG against WVA-positive samples from recently infected patients in Sao Paulo, Brazil. RESULTS: Both ELISAs detected a large fraction of infected patients but exhibited certain drawbacks. Higher signals and lower numbers of false-negatives were observed in rNP ELISA; however, a higher fraction of false-positives was observed in control groups. A high number of false-negatives was observed with WVA ELISA. Correlating the results of rNP and WVA ELISAs resulted in improved performance for COVID-19 diagnosis. CONCLUSION: The choice of antigen is an important aspect in optimizing the laboratory diagnosis of COVID-19. The use of rNP ELISA for the detection of anti-SARS-CoV-2 IgG antibodies seems promising, but comparison of the results with those of WVA ELISA is crucial for accurate test development prior to commercialization. IgG serology using several assays, and with the spectral patterns of SARS-CoV-2, resulted in confusing information that must be clarified before the establishment of diagnostic serology criteria.

Avaliação das reações de Hemaglutinação Indireta (HI) e Aglutinação Modificada (MAT) na detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii em exsudatos cárneos bovinos / Evaluation of indirect Hemagglutination (HI) and Modified Agglutination (MAT) reactions in the detection of anti-T. gondiiIgG antibodies in bovine meat exudates

Toxoplasmose é uma zoonose parasitária com ampla distribuição mundial provocada pelo Toxoplasma gondii, considerado um dos protozoários mais bem sucedidos do planeta, pois infecta cerca de um terço da população mundial. Dentre as formas de transmissão, o consumo de carne mal cozida, contendo cistos, tem sido considerado um fator de risco para aquisição desta zoonose. Uma abordagem alternativa para o controle da toxoplasmose pela ingestão de carne bovina seria a sorologia dos bovinos, já que animais soropositivos albergam cistos teciduais. Contudo, a obtenção de soro para esta avaliação, nem sempre é factível, dada a dificuldade de coleta de sangue durante a linha de abate e sua ausência em cortes comerciais. O exsudato cárneo é uma alternativa para detecção de anticorpos anti - T. gondii em cortes comerciais de carne, que foi a proposta deste estudo para avaliar o desempenho dos testes de Hemaglutinação Indireta (HI) e Aglutinação Modificada (MAT) quando comparados ao ELISA usando exsudato cárneo. Este estudo mostrou que a acurácia dos testes de aglutinação não foi viável devido aos baixos índices de sensibilidade e especificidade quando comparados ao ELISA. Estes dados demonstram a importância da escolha de testes eficientes como ELISA para aplicação no controle da qualidade e inocuidade de cortes comerciais de carne bovina. (AU)

Toxoplasmosis is a parasitic zoonosis with a wide worldwide distribution caused by Toxoplasmagondii, which is considered one of the most successful protozoa on the planet, since it can infect a third of the world population. Among the forms of transmission, consumption of undercooked meat has been considered as a risk factor for the acquisition of this zoonosis. An alternative approach to toxoplasmosis control by beef ingestion could be the serological diagnosis in cattle, since seropositives animals harbor tissue cysts. However, the use of serum for this evaluation is not always feasible due to the difficulty of blood collection during slaughter and its absence in commercial beef cuts. Meat exudate is an alternative for the detection of anti-T. gondii antibodies in commercial beef cuts, which was the propose of this study to evaluate the performance of Indirect Hemagglutination (HI) and Agglutination Modified (MAT) tests compared to ELISA using meat exudates. This study showed that the agglutination tests accuracy was not viable due to low sensitivity and specificity indexes when compared to ELISA. These data demonstrate the importance of choosing accurate tests such as ELISA for application in quality control and safety of commercial beef cuts. (AU)

Avaliação das reações de Hemaglutinação Indireta (HI) e Aglutinação Modificada (MAT) na detecção de anticorpos IgG anti-T. gondii em exsudatos cárneos bovinos / Evaluation of indirect Hemagglutination (HI) and Modified Agglutination (MAT) reactions in the detection of anti-T. gondii IgG antibodies in bovine meat exudates

Toxoplasmose é uma zoonose parasitária com ampla distribuição mundial provocada pelo Toxoplasma gondii, considerado um dos protozoários mais bem sucedidos do planeta, pois infecta cerca de um terço da população mundial. Dentre as formas de transmissão, o consumo de carne mal cozida, contendo cistos, tem sido considerado um fator de risco para aquisição desta zoonose. Uma abordagem alternativa para o controle da toxoplasmose pela ingestão de carne bovina seria a sorologia dos bovinos, já que animais soropositivos albergam cistos teciduais. Contudo, a obtenção de soro para esta avaliação, nem sempre é factível, dada a dificuldade de coleta de sangue durante a linha de abate e sua ausência em cortes comerciais. O exsudato cárneo é uma alternativa para detecção de anticorpos anti - T. gondii em cortes comerciais de carne, que foi a proposta deste estudo para avaliar o desempenho dos testes de Hemaglutinação Indireta (HI) e Aglutinação Modificada (MAT) quando comparados ao ELISA usando exsudato cárneo. Este estudo mostrou que a acurácia dos testes de aglutinação não foi viável devido aos baixos índices de sensibilidade e especificidade quando comparados ao ELISA. Estes dados demonstram a importância da escolha de testes eficientes como ELISA para aplicação no controle da qualidade e inocuidade de cortes comerciais de carne bovina.

Toxoplasmosis is a parasitic zoonosis with a wide worldwide distribution caused by Toxoplasma gondii, which is considered one of the most successful protozoa on the planet, since it can infect a third of the world population. Among the forms of transmission, consumption of undercooked meat has been considered as a risk factor for the acquisition of this zoonosis. An alternative approach to toxoplasmosis control by beef ingestion could be the serological diagnosis in cattle, since seropositives animals harbor tissue cysts. However, the use of serum for this evaluation is not always feasible due to the difficulty of blood collection during slaughter and its absence in commercial beef cuts. Meat exudate is an alternative for the detection of anti-T. gondii antibodies in commercial beef cuts, which was the propose of this study to evaluate the performance of Indirect Hemagglutination (HI) and Agglutination Modified (MAT) tests compared to ELISA using meat exudates. This study showed that the agglutination tests accuracy was not viable due to low sensitivity and specificity indexes when compared to ELISA. These data demonstrate the importance of choosing accurate tests such as ELISA for application in quality control and safety of commercial beef cuts.

Padronização da metodologia dot-ELISA para detecção de anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii em saliva / Standardization of dot-ELISA methodology for detection of IgG antibodies anti-Toxoplasma gondii in saliva

O diagnóstico da infecção pelo T. gondii é usualmente feito pelas técnicas sorológicas, mas a amostra (soro ou plasma) pode ser restrita em determinados grupos protegidos, em que a coleta de sangue é considerada agressiva e invasiva. Os anticorpos são encontrados em outros materiais biológicos, de coleta não invasiva, como a saliva. Os métodos de detecção de anticorpos no mercado estão padronizados para utilizar amostras de soro, e há metodologias alternativas de maior sensibilidade utilizando-se saliva, mas estas requerem equipamentos de difícil uso no campo. Dot-ELISA tem alta sensibilidade e leitura visual sem equipamentos, que facilita a execução de ensaio em campo utilizando-se técnica de triagem rápida e eficiente. Neste contexto, foi padronizado o dot-ELISA de alta sensibilidade para detecção de anticorpos anti-T. gondii em saliva e soro, utilizando-se amostras de 20 voluntários adultos. A sensibilidade e a especificidade do dot-ELISA padronizado foram semelhantes em soro e saliva, com exata distinção de amostras positivas e negativas, mesmo na ocorrência de baixas concentrações de anticorpos como na saliva. A saliva mostra ser material biológico adequado para detecção de anticorpos anti-T. gondii em estudos epidemiológicos da toxoplasmose em crianças ou outros grupos protegidos, em que a coleta de sangue é restrita...

HUMAN TOXOPLASMOSIS OUTBREAKS AND THE AGENT INFECTING FORM. FINDINGS FROM A SYSTEMATIC REVIEW / Surtos de toxoplasmose humana e a forma infectante do agente. Achados de revisão sistemática

SUMMARY Toxoplasmosis, a worldwide highly prevalent zoonotic infection, is transmitted either by the oocysts, from water and soil, or the tissue cysts, in raw or undercooked infected meat, of Toxoplasma gondii. An ongoing debate is whether there are differences between the clinical and epidemiological characteristics of the outbreaks due to one or the other infective form of the agent. We performed a systematic review, recovering 437 reported outbreaks of which 38 were selected. They were complete reports containing ascribed Toxoplasma infecting form, and clinical and demographic data. There was no gender or age group selection in the outbreaks, which were described more often in the Americas. A large number of individuals were affected when oocysts, associated with soil and water contaminated with cat feces, were considered the transmission source. Onset of symptoms occurred early when the infection was ascribed to meat tissue cysts (11.4 ± 6.7 days) with sharpened temporal distribution of cases, while a broader and prolonged appearance of new cases was observed when oocysts in water were the source of the infection (20 ± 7 days, p < 0.001). Such information may be useful in the design and implementation of control strategies.

RESUMO Toxoplasmose, infecção zoonótica altamente prevalente no mundo, é transmitida pela ingestão de oocistos em água e solo ou cistos teciduais em carne crua ou mal cozida. Um debate em andamento é se há diferenças nas características clínicas e epidemiológicas de surtos devido a uma ou outra forma infectante do agente. Realizamos revisão sistemática a partir de 437 relatos de surtos da doença, selecionando 38 artigos completos que descreveram a forma infectante do Toxoplasmacom dados clínicos e epidemiológicos. Não houve seleção por gênero ou faixa etária nos surtos, descritos mais frequentemente nas Américas. Quantidade maior de indivíduos foi afetada quando oocistos, associados com solo ou água contaminados com fezes de gato, foram considerados a fonte de transmissão. O início dos sintomas ocorreu mais precocemente quando a infecção foi atribuída a cistos na carne (11,4 ± 6,7 dias) com distribuição temporal nítida de casos, embora um aspecto mais amplo e prolongado de novos casos foi observado quando oocistos na água foram a fonte de infecção (20 ± 7 dias, p< 0.001). Essas informações podem ser úteis no desenvolvimento e implantação de estratégias de controle.

Canine visceral leishmaniasis and Chagas disease among dogs in Araguaina, Tocantins / Leishmaniose visceral canina e doença de Chagas em cães de Araguaina, Tocantins

The present study analyzed serum samples from 111 male and female dogs of various ages from the municipality of Araguaína in the State of Tocantins, Brazil. Serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL) was initially performed at the Central Laboratory (Laboratório Central ­ LACEN) of Araguaína, resulting in 61 positive samples by an indirect immunofluorescence assay (IIFA) (≥1:40) and 50 non-reactive samples. The same samples were analyzed at the São Paulo Institute of Tropical Medicine (Instituto de Medicina Tropical de São Paulo ­ IMTSP) by an enzyme-linked-immunosorbent assay (ELISA), resulting in 57 positive samples (51.35%) and 54 negative samples (48.64%). The Kappa coefficient of agreement between the tests was 0.74. The serum samples were also subjected to a diagnostic assay for Trypanosoma cruzi (Trypomastigote Excreted/Secreted Antigens -TESA-blot) that detected five suspect animals; three of those animals were positive for leishmaniasis by ELISA but negative by IIFA. These findings suggest that the canine population of Araguaína may be simultaneously infected with Leishmania chagasi and T. cruzi. The results obtained demonstrate the difficulty of using serology to detect CVL, thus emphasizing the necessity for a reference test to diagnose CVL, particularly in regions where the infection is endemic.

Neste estudo foram analisadas amostras de soros de 111 cães machos e fêmeas, de idades variadas, provenientes do município de Araguaína, estado do Tocantins, Brasil. O diagnóstico sorológico para leishmaniose visceral canina foi realizado, inicialmente, no Laboratório Central (LACEN) de Araguaína, resultando em 61 amostras positivas na Reação de Imunofluorescência Indireta - RIFI (≥1:40) e 50 amostras não reativas. As mesmas amostras foram analisadas no Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMTSP) pelo Enzyme-Linked-Immunosorbent Assay (ELISA), sendo 57 amostras positivas (51,35%) e 54 amostras negativas (48,64%), com coeficiente de concordância entre os testes (Kappa = 0,74). Os soros foram submetidos também a um teste de diagnóstico para Trypanosoma cruzi (Trypomastigote Excreted/Secreted Antigens-TESA-blot), o qual detectou cinco animais suspeitos, dos quais três foram positivos para leishmaniose no ELISA, mas negativos na RIFI. Estas observações mostram que a população canina de Araguaína pode também estar infectada simultaneamente com Leishmania chagasi e T. cruzi. Estes resultados mostram a dificuldade da sorologia na detecção da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), reforçando a necessidade de um teste de referência para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina, principalmente em regiões endêmicas para tais infecções.

Case-control study of an outbreak of acute toxoplasmosis in an industrial plant in the state of São Paulo, Brazil / Estudo caso-controle de surto de toxoplasmose aguda em indústria no estado de São Paulo, Brasil

Foodborne diseases represent operational risks in industrial restaurants. We described an outbreak of nine clustered cases of acute illness resembling acute toxoplasmosis in an industrial plant with 2300 employees. These patients and another 36 similar asymptomatic employees were diagnosed with anti-T. gondii IgG titer and avidity by ELISA. We excluded 14 patients based on high IgG avidity and chronic toxoplasmosis: 13 from controls and one from acute disease other than T. gondii infection. We also identified another three asymptomatic employees with T.gondii acute infection and also anti-T. gondii IgM positive as remaining acute cases. Case control study was conducted by interview in 11 acute infections and 20 negative controls. The ingestion of green vegetables, but not meat or water, was observed to be associated with the incidence of acute disease. These data reinforce the importance of sanitation control in industrial restaurants and also demonstrate the need for improvement in quality control regarding vegetables at risk for T. gondii oocyst contamination. We emphasized the accurate diagnosis of indexed cases and the detection of asymptomatic infections to determine the extent of the toxoplasmosis outbreak.

Doenças transmitidas por alimentos representam riscos operacionais em restaurantes industriais. Descrevemos surto de nove casos agrupados de doença aguda semelhante à toxoplasmose em indústria de 2300 funcionários. Estes pacientes e outros 36 funcionários assintomáticos foram diagnosticados por ELISA para o título e avidez de IgG anti-T. gondii. Foram excluídos 14 pacientes com toxoplasmose crônica e alta avidez: 13 de controles e um de doença aguda não relacionada à infecção por T. gondii. Também identificamos três empregados assintomáticos com infecção aguda por T.gondii, que como os restantes agudos apresentavam anti-T.gondii IgM ELISA positivo. Conduzimos estudo caso controle por entrevista em 11 infecções agudas e 20 controles negativos. A ingestão de vegetais, mas não de carne ou água, foi associada com a incidência da doença aguda. Esses dados reforçam a importância do controle sanitário em restaurantes industriais e também demonstram a necessidade de melhoria no controle de qualidade sobre vegetais em risco de contaminação por oocistos de T. gondii. Enfatizamos o diagnóstico preciso de casos e a detecção de infecções assintomáticas para determinar a extensão do surto de toxoplasmose.

Preliminary report of HIV and Toxoplasma gondii occurrence in pregnant women from Mozambique / Descrição preliminar da ocorrência de infecção pelo HIV e toxoplasmose em mulheres grávidas em Moçambique

Toxoplasmosis, a protozoan disease, causes severe disease in fetuses during pregnancy and deadly encephalitis in HIV patients. There are several studies on its seroprevalence around the world, but studies focusing on African countries are limited in number and mostly anecdotal. We studied two groups of samples from Mozambique by ELISA, using serum samples from 150 pregnant women and six Cerebrospinal fluid (CSF) samples from AIDS patients with encephalitis. HIV status was confirmed, and CD4 blood counts were obtained from HIV-positive pregnant women. IgG seroprevalence of the group as a whole was 18.7 percent (28/150), with a higher prevalence in HIV-positive individuals compared to those who were HIV-negative (31.3 percent, [18/58] vs. 10.9 percent, [10/92]) patients. These data may be biased due to cumulative effects of exposition affecting disease prevalence. If corrected, this data may indicate an interaction of HIV and T. gondii. Prevalence of both diseases increases with age, but this is more clearly seen for toxoplasmosis (p < 0.005) than HIV infection, possibly explained by higher transmission of HIV after childhood. In HIV patients suffering from encephalitis, CSF serology showed that 33 percent of specific IgG CSF had a high avidity, which was in accordance with the data from the group of pregnant women. Lower prevalence rates of both infections in older groups could be explained by more deaths in the infected groups, resulting in an artificially lower prevalence. Using CD4 counts as a marker of time of HIV infection, and correcting for age, patients with contact with T. gondii had fewer CD4 cells, suggesting prolonged HIV disease or other causes. Toxoplasma IgG prevalence is higher in HIV+ groups, which could be ascribed to HIV- and T. gondii-associated risk factors, such as exposure to higher and more diverse social contacts. The low incidence of Toxoplasma IgG in younger age groups shows that transmission could be related to better access to cyst-containing meat in adulthood, as environmental transmission due to oocysts is usually blamed for higher incidence in children. Taken together, these data support the urgent need of research in toxoplasmosis in Africa, especially in the presence of HIV epidemics.

Toxoplasmose, uma protozoonose, causa doença grave em fetos de mulheres grávidas com infecção aguda e encefalite letal em portadores de HIV. Apesar de muitos estudos sobre sua prevalência no Mundo, existem apenas alguns relatos da toxoplasmose na África Austral, geralmente anedóticos. Estudamos por ELISA dois grupos de amostras de Moçambique, usando 150 amostras de soros de mulheres grávidas e seis amostras de Liquido Cefalorraquidiano (LCR) de pacientes com AIDS e encefalite. O estado da infecção pelo HIV foi confirmado e a contagem de células CD4+ no sangue foi obtida das pacientes grávidas infectadas pelo HIV. No grupo das gestantes, IgG anti T.gondii foi encontrada em 18.7 por cento (28/150), mais freqüente em pacientes HIV positivas (31.3 por cento, 18/58) do que em HIV negativas (10.9 por cento, 10/92). A ocorrência de ambas as doenças aumenta com a idade, mais claramente vista na toxoplasmose (p < 0.005) do que na infecção pelo HIV, devido maior transmissão do HIV após a infância. Na encefalite em pacientes HIV+, a sorologia do LCR mostrou uma ocorrência de 33 por cento de IgG especifica de alta avidez, que está de acordo com a ocorrência neste grupo etário, baseado nos dados de nossas gestantes. A menor ocorrência de ambas as infecções em grupos etários mais idosos pode ser explicada pela mortalidade cumulativa por qualquer causa nos grupos mais idosos, resultando em menor ocorrência relativa. Usando as contagens de células CD4+ como marcadores da progressão da infecção pelo HIV e corrigindo para grupos etários, as gestantes HIV+ com contato com T. gondii tem menores níveis de células CD4+ do que as gestantes HIV+ sem contato com T.gondii. A ocorrência maior da toxoplasmose em gestantes HIV+ pode ser atribuída a fatores de risco semelhantes, como exposição a maior contato social. A baixa ocorrência da toxoplasmose em grupos mais jovens pode se relacionar com menor acesso a carne contendo cistos, já que a transmissão ambiental por oocistos está associada à maior incidência em crianças. Todos estes dados reforçam a necessidade de pesquisa da toxoplasmose na África Austral, especialmente na presença da epidemia pelo HIV.

Increased frequency of anti-retina antibodies in asymptomatic patients with chronic t. gondii infection

PURPOSE: To search for anti-retina antibodies that serve as markers for eye disease in uveitis. MATERIALS AND METHODS: Stored sera from patients with uveitis, ocular toxoplasmosis (n = 30) and non-infectious, immune-mediated uveitis (n = 50) and from asymptomatic individuals who were positive (n = 250) and negative (n = 250) for anti-Toxoplasma antibodies were tested. Serum anti-retina IgG was detected by an optimized ELISA using a solid-phase whole human retina extract, bovine S-antigen or interphotoreceptor retinoid-binding protein. RESULTS: Uveitis patients showed a higher mean reactivity to whole human retina extract, interphotoreceptor retinoid-binding protein and S-antigen in comparison to the asymptomatic population. These findings were independent of the uveitis origin and allowed the determination of the lower anti-retina antibody cut-off for the three antigens. Asymptomatic anti-Toxoplasma serum-positive individuals showed a higher frequency of antihuman whole retina extract antibodies in comparison to asymptomatic anti-Toxoplasma serum-negative patients. The bovine S-antigen and interphotoreceptor retinoid-binding protein ELISAs also showed a higher mean reactivity in the uveitis groups compared to the asymptomatic group, but the observed reactivities were lower and overlapped without discrimination. CONCLUSION: We detected higher levels of anti-retina antibodies in uveitis patients and in a small fraction of asymptomatic patients with chronic toxoplasmosis. The presence of anti-retina antibodies in sera might be a marker of eye disease in asymptomatic patients, especially when whole human retina extract is used in a solid-phase ELISA.

Serology using rROP2 antigen in the diagnostic of toxoplasmosis in pregnant women / Sorologia utilizando o antígeno recombinante ROP2 no diagnóstico da toxoplasmose em mulheres grávidas

Toxoplasma gondii causes severe fetal disease during acute infection in pregnant women, thus demanding early diagnosis for effective treatment and fetus preservation. Fetal tests are inefficient and risky, and diagnosis is based on maternal IgM serology, which had weak screening ability due to increased sensitivity, with alternative IgG avidity tests. Here, we performed ELISA and avidity assays using a recombinant T. gondii antigen, rROP2, in samples from 160 pregnant women screened from a large public hospital who were referred due to positive IgM assays. IgG serology and avidity assays were compared using whole T. gondii extract or rROP2. ELISA IgG detection with rROP2 showed good agreement with assays performed with T. gondii extract, but rROP2 IgG avidity assays were unrelated to whole extract antigen IgG avidity, regardless of the chaotrope used. These data show that avidity maturation is specific to individual antigen prevalence and immune response during infection. ELISA rROP2 IgG assays may be an alternative serological test for the diagnosis of toxoplasmosis during pregnancy, although our data do not support their use in avidity assays.

A toxoplasmose causa grave doença fetal durante a infecção aguda da gestante, assim demanda diagnóstico precoce para tratamento efetivo e preservação fetal. Os testes fetais são de baixa eficiência e o diagnóstico é baseado na sorologia para IgM materna, que tem fraca capacidade de triagem devido a sensibilidade crescente dos testes, sendo uma alternativa os testes de avidez de IgG. Apresentamos aqui um ELISA e ensaio de avidez de IgG usando antígeno recombinante de T. gondii, rROP2, em amostras de 162 gestantes triadas para um grande hospital público por uma sorologia positiva para IgM. O ELISA IgG e o ensaio de avidez de IgG foram comparados usando o antígeno rROP2 ou extrato total de T. gondii. O ELISA usando rROP2 mostrou excelente concordância com os ensaios usando extrato de T. gondii, mas nos ensaios de avidez usando rROP2, os valores encontrados não se relacionaram com os encontrados na avidez com extrato de T. gondii, independente do tipo de caotrópico utilizado. Estes dados mostram que a maturação da avidez é especifica para a resposta imune ou a prevalência de um antígeno durante a infecção. Os ELISA para IgG anti rROP2 podem ser teste sorológico alternativo para o diagnóstico da toxoplasmose durante a gravidez, embora nossos dados não apóiem seu uso em ensaios de avidez de IgG

Evidência sorológica da infecção aguda pelo Toxoplasma gondii em gestantes de Cascavel, Paraná / Serological evidence of acute Toxoplasma gondii infection in pregnant women in Cascavel, Paraná

Para verificar a ocorrência da toxoplasmose em Cascavel, Paraná, cidade próxima a região onde ocorreu o maior surto epidêmico descrito mundialmente, 334 amostras de soros de gestantes foram triadas pelo ensaio imunoenzimático comercial IgG no Laboratório Municipal de Cascavel, e confirmadas no Instituto de Medicina Tropical de São Paulo por imunofluorescência IgG, ensaio imunoenzimático e avidez de IgG in house. A soropositividade pelo IgG comercial foi 54,2 por cento, pela imunofluorescência 54,8 por cento e pelo IgG in house 53,9 por cento, com boa concordância entre imunofluorescência/IgG comercial (Kappa=0,963781; co-positividade=97,8 por cento; co-negatividade=98,7 por cento) e imunofluorescência/IgG in house (Kappa=0,975857; co-positividade=97,8 por cento; co-negatividade=100 por cento). A evidência de infecção aguda nas gestantes foi similar tanto pela avidez de IgG (2,4 por cento ao ano) como pela análise estatística de tendência (teste χ2) por faixa etária (2 por cento ao ano), sugerindo que a triagem sorológica pré-natal e a vigilância epidemiológica são imprescindíveis para redução do risco da toxoplasmose na região, embora sem evidência de surto epidêmico.

In order to investigate the incidence of toxoplasmosis in Cascavel, Paraná, a city near the region where the largest reported epidemic outbreak in the world occurred, 334 serum samples from pregnant women were screened using a commercial IgG immunoenzymatic assay at the Municipal Laboratory in Cascavel and were confirmed at the Institute of Tropical Medicine in São Paulo, by means of IgG immunofluorescence, immunoenzymatic assaying and the in-house IgG avidity test. The IgG seropositivity from the commercial test was 54.2 percent, from immunofluorescence 54.8 percent and from the in-house IgG 53.9 percent, with good agreement between immunofluorescence and the commercial IgG test (kappa = 0.963781; co-positivity = 97.8 percent; co-negativity = 98,7 percent) and between immunofluorescence and the in-house IgG (kappa = 0.975857; co-positivity = 97.8 percent; co-negativity = 100 percent). The evidence of acute infection among the pregnant women was similar, as estimated both by IgG avidity (2.4 percent/year) and by statistical trend analysis (χ2 test) according to age group (2 percent/year). This suggests that prenatal serological screening and epidemiological surveillance are essential for reducing the risk of toxoplasmosis in the region, although without evidence of an epidemic outbreak.

Quantitative toxoplasma gondii oocyst detection by a modified Kato Katz test using Kinyoun staining (KKK) in ME49 strain experimentally infected cats / Detecção quantitativa de oocistos de Toxoplasma gondii, por um teste modificado de Kato Katz usando coloração de Kinyoun (KKK), em gatos infectados experimentalmente com a cepa ME49

We detected Toxoplasma gondii oocysts in feces of experimentally infected cats, using a Kato Katz approach with subsequent Kinyoun staining. Animals serologically negative to T. gondii were infected orally with 5x10² mice brain cysts of ME49 strain. Feces were collected daily from the 3rd to the 30th day after challenge. Oocysts were detected by qualitative sugar flotation and the quantitative modified Kato Katz stained by Kinyoun (KKK). In the experimentally infected cats, oocysts were detected from the 7th to 15th day through sugar flotation technique, but oocysts were found in KKK from the 6th to 16th day, being sensitive for a larger period, with permanent documentation. The peak of oocysts excretion occurred between the 8th to 11th days after challenge, before any serological positive result. KKK could be used in the screening and quantification of oocysts excretion in feces of suspected animals, with reduced handling of infective material, decreasing the possibility of environmental and operator contamination.

Detectamos oocistos de Toxoplasma gondii em fezes de gatos experimentalmente infectados, usando a abordagem de Kato Katz, com subseqüente coloração pelo método de Kinyoun. Animais sorologicamente negativos ao T. gondii foram infectados por via oral com 5x10² cistos da cepa ME49 de cérebros de camundongos. Fezes foram colhidas diariamente a partir do 3º até o 30º dia pós-infecção. Oocistos foram detectados por centrífugo-flutuação em sacarose qualitativa e pelo método quantitativo de Kato Katz modificado corado pela técnica de Kinyoun (KKK). Em gatos experimentalmente infectados, oocistos foram detectados do 7º ao 15º dia pela técnica de centrífugo-flutuação em sacarose, mas oocistos foram detectados do 6º ao 16º dia pelo KKK, sendo sensível por um período maior, com documentação permanente. O pico da excreção de oocistos ocorreu entre 8º a 11º dia pós-infecção, antes de resultado sorológico positivo. KKK pode ser utilizado na triagem e quantificação da excreção de oocistos em fezes de animais suspeitos, com redução da manipulação de material infectante, diminuindo a possibilidade de contaminação ambiental e do operador.

Serological survey of antibodies to Toxoplasma gondii in food animals from São Paulo state, Brazil

A toxoplasmose é uma das infecções parasitárias mais prevalentes no homem e no rebanho, e a sua transmissão tem sido usualmente atribuída à ingestão de carnes cruas ou mal cozidas, de animais de produção infectados, sendo que a taxa de infecção destes animais pode ser um importante índice preditivo da doença humana, de alta prevalência no Brasil e no estado de São Paulo. Estudando este aspecto de Saúde Pública, nós testamos amostras séricas de bovinos, caprinos, ovinos e frangos de corte de matadouros do Estado de São Paulo, para a presença de anticorpos IgG anti-Toxoplasma gondii por um ensaio imunoenzimático de fase sólida (ELISA). Nós encontramos anticorpos específicos em 31,00 por cento (62/200) dos ovinos, 17,00 por cento(34/200) dos caprinos e 11,00 por cento (22/200) dos bovinos testados, sem positividade em 185 amostras de frangos de corte. Apesar de diferenças em hábitos alimentares de cada espécie, estas taxas de infecção foram menores em criações intensivas, relacionadas ao tipo de manejo da criação, o que pode reduzir a taxa de infecção por este parasita no rebanho.